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【佳學(xué)基因檢測】男性生殖基因檢測標(biāo)準(zhǔn)與專家共識

不孕不育已成為一個全球性的社會問題,影響著全世界約10% 的育齡夫婦,其中男性不育約占 50%[1]?;虍惓J悄行圆挥闹匾∫蛑?, 涉及多種疾病,例如由于染色體異?;蚧蜃儺悓?dǎo)

佳學(xué)基因檢測】男性生殖基因檢測標(biāo)準(zhǔn)與專家共識

(本文轉(zhuǎn)自:中華男科學(xué)雜志 National Journal of Andrology Zhonghua Nan Ke Xue Za Zhi 2020,26( 9) : 844 - 851)

不孕不育已成為一個全球性的社會問題,影響 著全世界約10% 的育齡夫婦,其中男性不育約占 50%[1]。遺傳學(xué)異常是男性不育的重要病因之一, 涉及多種疾病,例如由于染色體異?;蚧蜃儺悓?dǎo)致的非梗阻性無精子癥可高達(dá) 25%[2],并且隨著二代測序( next generation sequencing,NGS) 技術(shù)開始應(yīng)用于男性生殖領(lǐng)域,且比例逐年升高。遺傳學(xué)檢測已進(jìn)入多個歐美男性生殖相關(guān)臨床指南和共識, 這些指南與共識均建議對嚴(yán)重少精子癥和無精子癥患者進(jìn)行Y染色體微缺失篩查,對先天性雙側(cè)輸精管缺如患者進(jìn)行 CFTR基因檢測等[3-6]。對致病基因進(jìn)行檢測,可明確男性不育病因,有助于治療藥物選擇,預(yù)測睪丸外科取精成功概率以及判斷輔助生殖技術(shù)治療預(yù)后,并為患者提供遺傳學(xué)咨詢。有鑒于此,為了規(guī)范男性生殖相關(guān)基因檢測臨床應(yīng)用,中 華醫(yī)學(xué)會男科學(xué)分會組織本領(lǐng)域?qū)<覍ο嚓P(guān)基因檢測適應(yīng)證、檢測方法、檢測內(nèi)容和檢測意義等方面進(jìn)行歸納總結(jié),并結(jié)合我國的具體臨床實(shí)踐形成共識。

1、非梗阻性無精子癥和重度少精子癥

非梗 阻性無精子 癥 ( non-obstructive azoospermia,NOA) 和重度少精子癥約占男性不育患者總數(shù) 的 10% ~ 20% 。其中,染色體核型異常和 Y 染色體微缺失可解釋 15% ~ 20% 的NOA及重度少精子 癥[7]。除此之外,近年來已有較多研究證實(shí)多個單基因變異可導(dǎo)致 NOA。

1. 1 Y 染色體微缺失

1. 1. 1 概述

Y 染色體長臂上存在著控制睪丸發(fā)育、精子發(fā)生及維持的區(qū)域,稱為無精子癥因子 ( azoospermia factor,AZF) [8],該區(qū)域易發(fā)生同源重 組,從而導(dǎo)致缺失或重復(fù),引起少精子癥或無精子 癥。AZF 微缺失可解釋 7. 8% 的 NOA 和重度少精子癥[9]。根 據(jù) 缺失模 式,AZF主要劃分為AZFa、AZFbAZFc 三個區(qū)域。賊常見的缺失類型為 AZFc b2 /b4 亞型,占 60. 32%[9]。

1. 1. 2 臨床意義

AZFa 區(qū)有效缺失導(dǎo)致唯支持細(xì)胞綜合征( Sertoli cell only syndrome,SCOS) ; AZFb 區(qū)以及 AZFbc 區(qū)有效缺失會導(dǎo)致 SCOS 或者精子成 熟阻滯( maturation arrest,MA) [10]。以上兩類患者通過手術(shù)獲得精子的概率幾乎為零[10]。AZFa、 AZFb 區(qū)部分缺失類型可保留基因全部或部分編碼 區(qū),有可能正常產(chǎn)生精子[11]。AZFc 區(qū)缺失患者臨床表現(xiàn)異質(zhì)性高,50% 的 NOA 患者可通過睪丸手術(shù) 取精獲得精子。AZFc 區(qū)缺失將遺傳至男性后代,缺 失區(qū)域可進(jìn)一步擴(kuò)大。AZFc 缺失患者的精子數(shù)目有進(jìn)行性下降的趨勢,應(yīng)及早生育或冷凍保存精子。

1. 1. 3 檢測方法

對于精子濃度少于 5 × 106 /ml 的患者,推薦進(jìn)行 Y 染色體微缺失檢測。Y 染色體微缺失檢測推薦以下 6 個基礎(chǔ)位點(diǎn)檢測: sY84 及 sY86 對應(yīng) AZFa 區(qū),sY127 及 sY134 對應(yīng) AZFb 區(qū), sY254 及 sY255 對應(yīng) AZFc 區(qū)。為了區(qū)分部分缺失 和有效缺失,建議在 6 個基礎(chǔ)位點(diǎn)檢測基礎(chǔ)上,進(jìn)行拓展位點(diǎn)檢測[10]。Y 染色體微缺失檢測方法包括但不局限于實(shí)時熒光定量 PCR 法( qPCR) 、毛細(xì)管 電泳法( CE) 、NGS 等。 Y 染色體 AZF 區(qū)域缺失推薦檢測位點(diǎn)主要根據(jù)歐美人群建立,是否有效適用于中國人群尚無定 論。鼓勵有條件的醫(yī)療機(jī)構(gòu)通過高通量檢測技術(shù) ( 如 NGS) 進(jìn)行深入研究。

1. 2 單基因致病變異

1. 2. 1 概述

NOA 和重度少精子癥的致病基因主要與精子發(fā)生相關(guān)。睪丸病理學(xué)表型可從 MA 至 SCOS。

1. 2. 2 致病基因

致病基因涉及精子發(fā)生的多個生物學(xué)過程,包括且不局限于精原細(xì)胞增殖及分化 ( 例如 NANOS1、SOHLH1) ,聯(lián)會復(fù)合體形成( 例如 SYCE1、SYCP2、SYCP3、TEX11、MEIOB) ,同 源 重 組 修 復(fù) ( 例 如 TEX15、FANCM ) ,細(xì) 胞 間 橋 形 成 ( TEX14) 等,以上基因變異均可造成精子發(fā)生障礙。 其中,TEX11 變異可解釋約 2% 的 NOA 病因[12],其 他基因所占比例需要借助致病基因鑒定基因解碼進(jìn)行明確。

1. 2. 3 檢測意義和方法

上述基因變異導(dǎo)致的 NOA 患者,臨床上通過手術(shù)獲得精子的成功率較 低[13]。但臨床病例積累尚不足,鼓勵有條件的醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行相關(guān)研究,進(jìn)一步積累變異和病理對應(yīng)關(guān) 系。推薦對 NOA 患者在手術(shù)取精前,使用 NGS 對 無精子癥相關(guān)致病基因進(jìn)行檢測。

2 梗阻性無精子癥

2. 1 先天性輸精管缺如

2. 1. 1 概述

先天性輸精管缺如( congenital absence of the vas deferens,CAVD) 是梗阻性無精子癥 的重 要 病 因 之 一,占 不 育 男 性 的 1% ~ 2%[14]。 CAVD 分為先天性單側(cè)輸精管缺如( congenital unilateral absence of the vas deferens,CUAVD) 和先天性雙側(cè)輸精管缺如( congenital bilateral absence of the vas deferens,CBAVD) 。CBAVD 和部分 CUAVD 被認(rèn)為是囊性纖維化的輕度臨床表現(xiàn)[15]。目前認(rèn)為 CUAVD 伴腎臟發(fā)育不良或缺如和囊性纖維化無關(guān)[14]。

2. 1. 2 致病基因

CFTR 是囊性纖維化的致病基 因。多項(xiàng)中國患者人群研究表明,CFTR 變異可解 釋 68% ~ 80% 的 CBAVD,以 及 約 46% ~ 67% 的 CUAVD,這部分患者的 CAVD 被認(rèn)為是囊性纖維 化的輕度表現(xiàn)[16-19]。除 CFTR 外,ADGRG2 基因可 解釋約 2% 的 CBAVD 病因[14],另外 18% ~ 30% 左 右致病因素仍然未知。

2. 1. 3 檢測意義和方法

CBAVD 患者和不存在腎 臟異常的 CUAVD 患者應(yīng)篩查 CFTR 基因[20],如存 在變異,應(yīng)繼續(xù)篩查配偶 CFTR 基因,以判斷后代患 囊性纖維化風(fēng)險。由于中國 CAVD 患者人群不存 在高頻率熱點(diǎn)變異( 如 F508del) [17,21-24],推薦直接 篩查 CFTR 基因全部編碼區(qū)和 IVS9-5T [25]。另外, 推薦同時篩查 ADGRG2 基因,如存在變異,患者男性后代無遺傳風(fēng)險,女性后代為變異攜帶者。

2. 2 常染色體顯性多囊腎

2. 2. 1 概述

常染色體顯性遺傳性多囊腎病( autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD) 的男性患者可出現(xiàn)精囊腺、附睪、前列腺部位等生殖 道囊腫,引起嚴(yán)重少弱精子癥、死精子癥,甚至梗阻性無精子癥,進(jìn)而導(dǎo)致不育[26]。

2. 2. 2 致病基因

PKD1,PKD2 和 GANAB 基因變 異可引起 ADPKD[27],分別占比 80% ~ 85% ,15% ~ 20% 和 0. 3% 左右。

2. 2. 3 檢測意義和方法

PKD1 基因存在 6 個具有極高序列相似性的假基因,需要優(yōu)化 NGS 捕獲探針和 Sanger 測序驗(yàn)證引物,以達(dá)到正確檢出目的。 由于 ADPKD 為常染色體顯性遺傳性模式,遺傳概率為 50% ,建議遺傳咨詢,在生育時建議采取產(chǎn)前診斷或胚胎植入前基因檢測( preimplantation genetic testing,PGT) ,避免疾病遺傳給后代。

3 畸形精子癥

畸形精子癥( teratozoospermia) 指精子正常形態(tài)所占百分比低于 4%[28]。畸形精子癥的表型具有明顯的異質(zhì)性,不同患者的異常精子形態(tài)不盡相同。 特殊類型畸形精子癥是指精子形態(tài)表現(xiàn)為某種高度 一致性的畸形。現(xiàn)已明確的特殊類型畸形精子癥主要包括精子尾部多發(fā)形態(tài)異常( multiple morphological abnormalities of the sperm flagella,MMAF) 、大頭多尾 精子 癥 ( large-headed multiflagellar spermatozoa) 、圓 頭 精 子 癥 ( globozoospermia) 、無 頭 精 子 癥 ( acephalic spermatozoa syndrome) 。

3. 1 精子尾部畸形

3. 1. 1 概述

精子尾部畸形主要分為 MMAF 與原發(fā)性纖毛運(yùn)動障礙( primary ciliary dyskinesia,PCD) 兩類。MMAF 主要表現(xiàn)為精子尾部形態(tài)異常,目前主要分為: 無尾、短尾、卷尾、折尾以及尾部不規(guī)則增 粗,其中短尾精子約占 50% 以上。由于精子尾部畸形影響精子運(yùn)動能力,從而導(dǎo)致 MMAF 患者往往還 伴發(fā)嚴(yán)重的弱精子癥[29-30]。PCD 主要表現(xiàn)為呼吸道纖毛運(yùn)動障礙導(dǎo)致的慢性呼吸系統(tǒng)炎癥( 支氣管 擴(kuò)張和鼻竇炎) ,如果合并胚胎節(jié)纖毛運(yùn)動障礙導(dǎo)致的內(nèi)臟轉(zhuǎn)位則稱為 Kartagener 綜合征( Kartagener syndrome) [31]。PCD 患者與 MMAF 患者在精子鞭毛 形態(tài)異常表型相似,但 PCD 患者除了精子鞭毛形態(tài)異 常之外,常伴有呼吸道感染及肺部感染等癥狀[32]。

3. 1. 2 致病基因

Ben Khelif 等新穎提出 MMAF 概念并報道了先進(jìn)個致病基因 DNAH1 [30]。截止目 前,共報道了超過 20 個致病基因,可以解釋大約 60% 的 MMAF 病例[30,33-44]。另外,已發(fā)現(xiàn)大約有 40 個 PCD 相關(guān)致病基因[45]。PCD 與 MMAF 致病基因有所重疊,例如 CCDC39 基因除了導(dǎo)致 PCD 之外, 同時也被證實(shí)與 MMAF 表型有關(guān)[46]。

3. 1. 3 檢測意義和方法

一般而言,遺傳原因?qū)е翸MAF 不建議藥物治療,使用 ICSI 可有效幫助患 者實(shí)現(xiàn)生育。因此需要通過 NGS 進(jìn)行 MMAF 相關(guān)基因檢測。另外,部分報道表明不同基因變異導(dǎo)致 的 MMAF 可能導(dǎo)致不同的 ICSI 結(jié)局,但目前研究樣 本有限,鼓勵有條件中心開展不同基因變異導(dǎo)致的 MMAF 與 ICSI 結(jié)局的關(guān)系[47]。

3. 2 精子頭部畸形

精子頭部畸形主要有大頭精 子、圓頭精子、無頭/大頭針狀精子、雙頭精子、梨形 頭精子及無定型頭精子,而通常單一畸形精子超過 85% 的患者,基因異常概率較大,混合畸形精子癥的 患者出現(xiàn)基因異常的可能性較小。目前的研究主要 針對大頭精子癥、圓頭精子癥和大頭針狀精子癥的 遺傳基因有了比較明確的認(rèn)識,而其他類型的頭部 畸形目前仍未找到明確的基因異常[48]。

3. 2. 1 大頭多尾精子癥

3. 2. 1. 1 概述

大頭多尾精子癥患者精液中精子 頭部形態(tài) 100% 異常,主要表現(xiàn)為精子形態(tài)異常( 大 頭,多頭,多尾,頂體異常) ,精子染色體 FISH 分析 提示精子染色體異常,從單倍體到四倍體不等。

3. 2. 1. 2 致病基因

AURKC 是目前少有明確導(dǎo) 致大頭多尾精子癥的基因,致病變異可使中期染色 體錯配,導(dǎo)致減數(shù)分裂失敗和多倍體[49]。

3. 2. 1. 3 檢測意義和方法

通過基因檢測明確為 AURKC 基因變異的大頭多尾精子癥患者,由于精子染 色體大多呈非整倍體,輔助生殖技術(shù)治療預(yù)后較差[50]。

3. 2. 2 圓頭精子癥

3. 2. 2. 1 概述

圓頭精子癥主要特征表現(xiàn)為頂體 缺失,精子頭部形狀呈圓形。精子頭部頂體缺失使得精子無法附著并穿過卵子透明帶從而導(dǎo)致原發(fā)性 不育。

3. 2. 2. 2 致病基因

遺傳因素是導(dǎo)致圓頭精子癥 的主 要 原 因,現(xiàn)已報道的致病基因有 DPY19L2、 PICK1、SPATA16 等,其中 DPY19L2 基因變異或缺失 是賊常見的遺傳因素[48]。

3. 2. 2. 3 檢測意義和方法

明確由于基因變異導(dǎo) 致的圓頭精子癥患者,其生育后代的少有途徑為 ICSI,一般需結(jié)合卵母細(xì)胞激活完成受精,但其治療結(jié)局有時依然并不理想[48,51]。

3. 2. 3 無頭精子癥

3. 2. 3. 1 概述

無頭精子癥主要表現(xiàn)為精液中有大量活動的大頭針狀精子,少部分精子有頭部,但也與尾部呈不規(guī)則折角連接[52]。由于這些精子幾乎 頭尾有效分離,使其幾乎不可能完成自然生育[53]。

3. 2. 3. 2 致病基因

無頭精子癥一般為單基因隱 性遺 傳 模 式,目前已報道的基因包括 SUN5、PMFBP1、BRDT、TSGA10 等,其中 SUN5 和 PMFBP1 是導(dǎo)致無頭精子癥的賊常見致病基因[54]。

3. 2. 3. 3 檢測意義和方法

無頭精子癥患者幾乎 無法完成自然生育,ICSI 是此類患者獲得后代有效 的方法[50,54]。但是,部分報道表明不同基因變異導(dǎo) 致的無頭精子癥,可能導(dǎo)致不同的 ICSI 結(jié)局,但研 究樣本數(shù)有限[55-56]。 此外,現(xiàn)已明確幾種特殊畸形精子癥的致病基 因均為常染色體隱性遺傳,沒有明顯熱點(diǎn)突變,并非 PGT 指征,但需告知患者遺傳風(fēng)險。

4 性發(fā)育異常

4. 1 概述

男性性發(fā)育異常( disorders of sexdevelopment,DSD) 患者主要以外生殖器男性化不足為特征,可有性腺發(fā)育異常,伴或不伴苗勒管結(jié)構(gòu)。根 據(jù)患者染色體情況,分為 46,XY DSD、46,XX DSD 及性染色體異常導(dǎo)致的 DSD?;颊吲R床表現(xiàn)復(fù)雜 多樣,例如 46,XY DSD 患者外生殖器可表現(xiàn)為有效 女性化到有效男性化[57]。 46,XY DSD 發(fā)病率約為1 /6 000,根據(jù)具體的發(fā) 病原因分為睪丸發(fā)育不良、雄激素合成障礙、雄激素 作用異常( 如有效和部分雄激素不敏感綜合征) ,其 他原因如苗勒管永存綜合征和單純性尿道下裂等。 46,XX DSD 根據(jù)具體病因分為卵巢發(fā)育異常,母親 或胎兒雄激素過量及其他原因( 如苗勒管發(fā)育不 良) 導(dǎo)致的性發(fā)育異常。性染色體異常主要是由于 47,XXY( Klineflter 綜合征及變異型) 、45,X/46,XY 或者 46,XX/46,XY 鑲嵌導(dǎo)致的性發(fā)育異常[58]。

4. 2 致病基因

DSD 遺傳背景復(fù)雜,包括多種基 因變異[59]。34% ~ 45% 的 DSD 患者可以明確致病 基因[60-63]。NR5A1 基因變異是 46,XY DSD 較為常 見的病因,約占10% ~ 20%[64]。尿道下裂作為性發(fā) 育異常的嚴(yán)重臨床表現(xiàn),約 50% 患 者 能 檢 出 SRD5A2 或 AR 變異[65]。

4. 3 檢測意義和方法

不同基因變異導(dǎo)致的性發(fā) 育異常的治療方式和預(yù)后差異較大,例如,SRD5A2 異??蓪?dǎo)致睪酮轉(zhuǎn)化雙氫睪酮障礙,可通過雄激素 替代、外用雙氫睪酮等方式治療。AR 異常則提示激 素替代治療預(yù)后差或無效。推薦使用 NGS 對非染 色體異常原因的性發(fā)育異?;颊哌M(jìn)行基因檢測以明 確病因[58]。

5 特發(fā)性低促性腺激素性性腺功能減退癥

5. 1 概述

特發(fā)性低促性腺激素性性腺功能減退 癥( idiopathic hypogonadotropic hypogonadism,IHH)是由于下丘腦促性腺激素釋放激素( GnRH) 合成、 分泌或作用障礙,導(dǎo)致垂體分泌促性腺激素減少,進(jìn) 而引起性腺功能不足的疾病。臨床根據(jù)患者是否合 并嗅覺障礙,將 IHH 分為兩類: 伴有嗅覺受損者的 Kallmann 綜合征( Kallmann syndrome) 和嗅覺正常的 IHH( normosmic IHH,nIHH) [66]。

5. 2 致病基因

目前已發(fā)現(xiàn)超過 30 個基因可導(dǎo)致 IHH,可解釋約 50% 的病例,其中 2. 5% 的患者可發(fā) 現(xiàn) 2 個或 2 個以上的基因變異,即存在寡基因致病 模式[67]。IHH 可伴發(fā)其他身體異常,如聯(lián)帶運(yùn)動 ( ANOS1) 、牙發(fā)育不全( FGF8 /FGFR1) 或聽力損失 ( CHD7) 等[68],應(yīng)在臨床檢查中加以關(guān)注,以降低漏 檢率。中國人群 IHH 患者中常見的基因異常 有 PROKR2、CHD7、FGFR1、ANOS1 等[69],推薦優(yōu)先進(jìn) 行篩查。IHH 新致病基因仍然在不斷發(fā)現(xiàn),用于臨 床診斷時應(yīng)該評估臨床證據(jù)是否充分。

5. 3 檢測意義和方法

IHH 致病基因遺傳模式各有不同,例如 ANOS1 基因?yàn)?X 染色體隱性遺傳,而 FGFR1 和 PROKR2 為常染色體顯性遺傳。需注意 的是,部分常染色體顯性遺傳的 IHH 基因存在外顯 率不全,即使變異遺傳給后代,也可能不發(fā)病或癥狀 較輕微,在遺傳咨詢時需加以說明。基因檢測結(jié)果可能用于 提 示 IHH 治 療,例 如 GnRH 受 體 基 因 GNRHR發(fā)生變異,可能預(yù)示 GnRH 脈沖治療預(yù)后 差; PROKR2 變異患者可能 hCG 治療預(yù)后差[16],但 上述證據(jù)尚不充分,鼓勵有條件的醫(yī)療中心進(jìn)行相關(guān)研究。推薦使用 NGS 對 IHH 致病基因進(jìn)行檢測。

6 基因檢測結(jié)果對臨床管理的影響

基因檢測可明確不育癥具體病因,以此判斷藥 物治療效果、顯微取精或輔助生殖技術(shù)治療預(yù)后,并 預(yù)測后代遺傳風(fēng)險。然而,多數(shù)基因變異發(fā)生率低, 且有很多變異致病性需要借助致病基因鑒定基因解碼進(jìn)行明確,需不斷積累相關(guān)基 因診斷和臨床數(shù)據(jù),以進(jìn)一步提高基因檢測臨床使 用價值。

6. 1 減少嘗試性治療

對于原因不明或者特發(fā)性男性不育癥,患者可能經(jīng)歷多次無效的試驗(yàn)性治療。 基因檢測可幫助一部分患者明確病因,從而選擇合適的治療方案。具體有以下幾個方面: ①減少不必 要的藥物治療。例如,DNAH1 基因變異可導(dǎo)致精子 尾部畸形率高,藥物治療無效,可建議 ICSI,并有文 獻(xiàn)證明妊娠結(jié)局良好[70]; ②判斷顯微取精手術(shù)預(yù) 后。AZFa 或 AZFb 區(qū)有效缺失的 NOA 患者,通過 顯微取精手術(shù)幾乎不可能獲得精子[10]; TEX11 基因 變異可導(dǎo)致減數(shù)分裂停滯而引起 NOA[12],通過顯微取精手術(shù)獲得成熟精子概率較低; ③輔助生殖技 術(shù)治療預(yù)后。由 AURKC 基因變異導(dǎo)致的大頭多鞭 毛精子,其基因組為多倍體,ICSI 妊娠結(jié)局差; 部分 MMAF 相關(guān)基因如 DNAH17、CFAP65 等發(fā)生變異可 能導(dǎo)致 ICSI 預(yù)后不良[47],但由于研究病例數(shù)較少, 證據(jù)尚不充分。

6. 2 遺傳咨詢

部分由于遺傳異常導(dǎo)致的男性不 育患者可通過促性腺激素或促性腺激素釋放激素補(bǔ) 充治療或替代治療、顯微取精手術(shù)等方式成功生育 生物學(xué)后代,該類患者需重視遺傳咨詢,防止子代出現(xiàn) 相同癥狀。在明確基因診斷結(jié)果和臨床意義后,對于 符合指征的患者可建議產(chǎn)前診斷或 PGT。

7 基因檢測方法對結(jié)果正確性的影響

基因檢測技術(shù)發(fā)展至今,已有多種方法,它們因 其自身優(yōu)勢和劣勢,一般存在賊佳適用場景。目前 在臨床基因檢測中比較常見的技術(shù)主要包括 Sanger 測序、實(shí)時定量 PCR、NGS 等。Sanger 測序和實(shí)時定 量 PCR 的適用范圍相似,主要應(yīng)用于單堿基位點(diǎn)變 異或者小片段插入缺失的檢測,其優(yōu)勢在于正確性 高、檢測速度快,但缺點(diǎn)是檢測通量較低。NGS 的 出現(xiàn)彌補(bǔ)了此缺點(diǎn),極大降低了對多個基因區(qū)域同 時進(jìn)行測序的時間和費(fèi)用,數(shù)據(jù)正確性高,已被臨床 廣泛用于遺傳病診斷,同時更快推動了疾病的研究 進(jìn)展。見表 1。

表 1 常用基因檢測技術(shù)的比較
Table 1. Comparison of common genetic testing technologies

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  Sanger測序 實(shí)時定量 PCR 技術(shù) NGS
適用范圍 適用于少量位點(diǎn)的檢測,可檢測已知與未知變異 適用于少量位點(diǎn)的檢測,只能檢測已知變異 適用于全基因組檢測,可檢測已知與未知變異
檢測通量 每個反應(yīng)只能檢測一條序列 受限于可用熒光通道數(shù),只能檢測少數(shù)位點(diǎn)變異 高通量檢測
正確性 正確性高 正確性高 正確性較高
檢測費(fèi)用 少量位點(diǎn)檢測成本較低,但如在單個樣本內(nèi)檢測位點(diǎn)較多時,成本極高 采用熒光顯色法,單位點(diǎn)成本高 總體費(fèi)用較高,但單位點(diǎn)檢測成本低
臨床應(yīng)用 較多用于 NGS 結(jié)果的驗(yàn)證 主要用于單個基因或少數(shù)位點(diǎn)的基因檢測 主要應(yīng)用于單基因遺傳病的診斷

由于男性不育遺傳病因?qū)W極為復(fù)雜,涉及基因 較多,且變異大多未經(jīng)報道,建議使用 NGS 同時對多個相關(guān)基因進(jìn)行檢測,推薦使用 NGS panel 對本 共識推薦的致病基因進(jìn)行變異檢測[69,71-72]。相對 于 全 外 顯 子 組 測 序 ( whole exome sequencing, WES) ,NGS panel 具有以下優(yōu)點(diǎn): ①僅檢測具有明 確臨床證據(jù)的基因,避免誤診; ②NGS panel 可通過 增加探針覆蓋,檢測有明確臨床意義的非外顯子區(qū) 域,這些區(qū)域在 WES 檢測中會被遺漏; ③檢測成本 低于 WES 的前提下,NGS panel 可獲得更高測序深 度和均一性,從而高效檢出敏感性和特異性,有利于 提示鑲嵌變異。

需要注意的是,當(dāng)檢測目標(biāo)基因區(qū)域存在特殊 性,可能導(dǎo)致檢測結(jié)果錯誤或漏檢: ①同源假基因的 影響。男性生殖相關(guān)基因中,相當(dāng)一部分存在同源 假基因,如 ADPKD 致病基因 PKD1,IHH 致病基因 ANOS1,與性發(fā)育異常相關(guān)的先天性腎上腺皮質(zhì)增 生致病基因 CYP21A2,其假基因同源性大于 90% , 部分外顯子區(qū)域同源性大于 98% 。同源性高的區(qū) 域會嚴(yán)重影響基因檢測結(jié)果,因此應(yīng)該對該類基因在實(shí)驗(yàn)方法或生物信息學(xué)算法上進(jìn)行優(yōu)化以區(qū)分真 假基因,找到真正的致病位點(diǎn)。推薦在文庫構(gòu)建過 程中,通過加入抑制探針,抑制假基因的擴(kuò)增,從而 對真基因/功能基因進(jìn)行富集,提高基因檢測對真假 基因的識別能力。②拷貝數(shù)變異影響。拷貝數(shù)變異 特別 是 雜 合 型、鑲嵌型拷貝數(shù)缺 失,需 優(yōu) 化 NGS panel 探針設(shè)計(jì)或補(bǔ)充其他檢測方法,以避免假陽性 或漏檢; 當(dāng)存在某些復(fù)雜類型的結(jié)構(gòu)變異時,需優(yōu)化 生物信息學(xué)算法,以避免遺漏真實(shí)存在的變異導(dǎo)致 假陰性。

此外,鑒于男性生殖相關(guān)基因的高度遺傳異質(zhì) 性,鼓勵有條件的醫(yī)療機(jī)構(gòu)在中華醫(yī)學(xué)會男科學(xué)分 會統(tǒng)籌協(xié)調(diào)下,協(xié)作建立中國人群特有男性生殖相 關(guān)基因數(shù)據(jù)庫和與之對應(yīng)的表型數(shù)據(jù)庫,以便為后續(xù) 的臨床基因診斷和遺傳咨詢提供堅(jiān)實(shí)的數(shù)據(jù)支撐。

總之,遺傳學(xué)檢查對于指導(dǎo)男性生殖相關(guān)疾病 診療有重要意義,基因檢測指征及處理策略需要在 臨床中不斷完善。隨著檢測技術(shù)飛速發(fā)展及更多臨 床研究的開展,基因檢測在男性生殖相關(guān)疾病診斷 中的應(yīng)用也將更為深入與規(guī)范。

男性生殖相關(guān)基因檢測專家共識編寫組

顧 問:

鄧春華( 中山大學(xué)附屬先進(jìn)醫(yī)院)
谷翊群( 國家衛(wèi)生健康委科學(xué)技術(shù)研究所)
組 長: 商學(xué)軍( 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬金陵醫(yī)院)
副組長: 李 錚( 上海市先進(jìn)人民醫(yī)院)
孫 斐( 南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

編 委: ( 排名不分先后)

<div font-size:14px;line-height:26px;text-indent:26px;"=""> 楊曉玉( 江蘇省人民醫(yī)院)
史軼超( 常州市第二人民醫(yī)院)
顏宏利( 海軍軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院)
盧慕峻( 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院)
張峰彬( 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院)
金曉東( 浙江醫(yī)科大學(xué)先進(jìn)附屬醫(yī)院)
傅 強(qiáng)( 山東省立醫(yī)院)
張志超( 北京大學(xué)先進(jìn)醫(yī)院)
彭 靖( 北京大學(xué)先進(jìn)醫(yī)院)
杜 強(qiáng)( 中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院)
高 勇( 中山大學(xué)附屬先進(jìn)醫(yī)院)
劉貴華( 中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院)
王 瑞( 鄭州大學(xué)先進(jìn)附屬醫(yī)院)
王 濤( 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院)
劉 剛( 中信湘雅生殖與遺傳專科醫(yī)院)
周 興( 湖南中醫(yī)藥大學(xué)先進(jìn)附屬醫(yī)院)
李和程( 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院)
蔣小輝( 四川大學(xué)華西第二醫(yī)院)
安 淼( 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院)

執(zhí) 筆:

楊曉玉( 江蘇省人民醫(yī)院)
劉貴華( 中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院)
安 淼( 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院)

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